冷泉港蛋白质组学实验手册 / (美) A.J. 林克, J. 拉巴厄编 ; 曾明, 王恒樑, 王斌等译. -- 北京 : 化学工业出版社, 2012. – (58.17421057 /4440)

Contents

    目 录<br>    
    简介
    实验1 全细胞裂解物的双向凝胶电泳和MALDI质谱分析
    操作程序1—1酵母细胞裂解液的制备
    操作程序1—2IPG胶条的再水化和等电聚焦
    操作程序1—3等电聚焦胶条的平衡
    操作程序1—4第二向——SDS——PAGE
    操作程序1—5用SYPRO Ruby进行全蛋白染色
    操作程序1—6用Pro—Q Diamond进行磷酸化蛋白染色
    操作程序1—7用Pro—Q Emerald进行糖蛋白染色
    操作程序1—8用考马斯亮蓝进行全蛋白染色
    操作程序1—9用质谱兼容的银染进行全蛋白染色
    操作程序1—102D胶的图像分析和蛋白质回收
    操作程序1—11胶内酶切
    操作程序1—12 MALDI点靶
    实验2 用于质谱分析的蛋白质复合物的纯化
    操作程序2—1培养并收集TAP标记的酵母细胞
    操作程序2—2为纯化TAP标记蛋白质复合物制备酵母细胞抽提物
    操作程序2—3第一步亲和富集——利用IgG亲和色谱从酵母抽提物中捕获TAP标记的蛋白质复合物<br>    操作程序2—4第二步亲和富集——TAP—标记的蛋白质复合物的钙调蛋白亲和色谱
    操作程序2—5与磁珠的结合
    操作程序2—6蛋白质复合物的亲和纯化
    实验3 用MALDI TOF／TOF 串联质谱进行肽的定性和定量分析
    操作程序3—1实验描述
    实验4 蛋白质复合物分析——高灵敏液相色谱与串联质谱联用
    操作程序4—1HPLC柱毛细管的制作
    操作程序4—2填装微毛细管FSC柱
    操作程序4—3微毛细管RP—HPLC与ESI—质谱联用
    实验5用IMAC和质谱分析磷酸化肽
    操作程序5—1制备IMAC样品
    操作程序5—2制备IMAC柱和反相捕获柱（前柱）
    操作程序5—3制备IMAC柱
    操作程序5—4样品处理
    实验6 全细胞裂解物的多维蛋白质鉴定技术分析
    操作程序6—1使用多维蛋白质鉴定技术分析全细胞裂解物
    实验7 全细胞提取物的定量质谱检测技术（ITRAQ）
    操作程序7—1从酵母细胞制备肽
    操作程序7—2以iTRAQ试剂标记肽
    操作程序7—3应用反向色谱柱提纯肽
    操作程序7—4多肽等电聚焦
    实验8 串联质谱数据的分析及确认
    操作程序8—1使用Global Proteome Machine系统分析LC—MS／MS数据
    操作程序8—2使用ProteinPilot软件进行肽段和蛋白质鉴定
    操作程序8—3对数据库检索程序鉴定为能够匹配肽段序列的MS／MS谱图进行评价
    实验9开放阅读框的高通量克隆——构建大量表达结构
    操作程序9—1利用Gateway LR反应构造表达结构
    操作程序9—2用Gateway LR反应产物化学转化感受态细菌
    实验10 蛋白质微阵列的构建——核酸可编程性蛋白质阵列
    操作程序10—1用氨基甲硅烷包被载玻片
    操作程序10—2在96孔板中制备细菌的培养物
    操作程序10—3从96孔板中分离质粒DNA
    操作程序10—4DNA的生物素化、沉淀及样品布阵
    操作程序10—5NAPPA载玻片上蛋白质的表达
    操作程序10—6检测NAPPA载玻片上的蛋白质
    操作程序10—7在NAPPA芯片上测定DNA
    实验11 使用核酸可编程性蛋白质阵列鉴定蛋白质—蛋白质相互作用
    操作程序11—1NAPPA芯片与查询蛋白共表达
    操作程序11—2在NAPPA芯片上检测查询蛋白
    附录1 钠升电喷雾电离离子源和串联质谱装置和示范
    附录2 溶液内蛋白质的消化
    附录3 凝胶内胰酶消化已分离蛋白
    附录4 三氯乙酸蛋白质沉淀法
    附录5 氨基酸的单同位素和亚铵离子分子量
    附录6 氨基酸二肽分子量
    附录7 LTQ离子阱的使用方法
    附录8 肽段混合物离线去盐
    附录9 感受态细胞的制备
    附录10 DNA的定量
    附录11 注意事项
    索引