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精编细胞生物学实验指南 / (美) J. S. 博尼费斯农 ... [等]著 ; 章静波 ... [等]主译.——北京:科学出版社,2007.—(58.15057/4375) |
Contents
目 录<br>
译者序
前言
第1章 细胞培养 l
单元1．1 哺乳动物细胞培养的基本方法 2
单元1．2 适于哺乳动物细胞的培养基 6
单元1．3 细胞培养的无菌技术 ll
单元1．4 灭菌和过滤 13
单元1．5 确定和控制细胞培养的微生物污染 19
单元1．6 酵母培养及培养基 24
第2章 细胞的制备与分离 35
单元2．1 成纤维细胞培养的建立 36
单元2．2 人淋巴细胞的制备和培养 40
单元2．3 人脐静脉内皮细胞的制备 44
单元2．4 转染EB病毒产生永生的B细胞株 45
单元2．5 激光捕获显微切割 46
第3章 亚细胞组分分离和细胞器分离 50
单元3．1 细胞组分分离概述 5l
单元3．2 分离大鼠肝细胞质膜片层与浆膜结构域 59
单元3．3 利用差速及密度梯度离心法从组织和细胞中分离Golgi膜 66
单元3．4 利用差速离心及密度梯度离心从组织及细胞中分离溶酶体 72
单元3．5 差速离心法从组织和细胞中分离线粒体 76
单元3．6 密度梯度离心法纯化粗线粒体组分 81
单元3．7 用差速离心法和密度梯度离心法从组织和细胞中分离过氧化物体 86
单元3．8 从哺乳动物组织中分离细胞核及核膜 93
单元3．9 酿酒酵母的亚细胞组分分离 99
第4章 细胞生物学研究的工具——抗体 135
单元4．1 单克隆抗体的制备 136
单元4．2 多克隆抗体的制备 142
单元4．3 免疫球蛋白G的纯化 145
单元4．4 抗体缀合物用于细胞生物学研究 150
第5章 显微镜术 156
单元5．1 光学显微镜的校准及调节 157
单元5．2 荧光显微镜术 170
单元5．3 免疫荧光染色 175
单元5．4 荧光染料及荧光脂类衍生物标记细胞器 177
单元5．5 基本共聚焦显微镜术 183
单元5．6 用免疫过氧化物酶方法定位培养细胞和组织的抗原 191
单元5．7 低温免疫金电子显微镜技术 196
单元5．8 相关的视频光学／电子显微镜术 20l
单元5．9 活细胞内微管和肌动蛋白丝的荧光斑点显微镜技术(FSM) 205
单元5．10 作为活细胞影像工具的GFP 219
第6章 细胞蛋白质的特性 225
单元6．1 膜结合蛋白质的分析 226
单元6．2 蔗糖密度梯度区带沉淀法测定分子质量 230
单元6．3 体积排阻层析法(凝胶过滤)测定分子质量 237
第7章 电泳与免疫印迹 244
单元7．1 蛋白质的单向SDS凝胶电泳 246
单元7．2 非变性条件下的单向凝胶电泳 256
单元7．3 双向凝胶电泳 261
单元7．4 蛋白质单向平板凝胶等电聚焦电泳 270
单元7．5 蛋白质的琼脂糖凝胶 271
单元7．6 凝胶中蛋白质的染色 273
单元7．7 免疫印迹和免疫检测 277
单元7．8 凝胶和印迹中放射性标记蛋白的检测和量化 283
第8章 蛋白标记和免疫沉淀 289
单元8．1 用放射性标记的氨基酸进行代谢性标记 290
单元8．2 用放射性标记的糖代谢性标记糖蛋白 295
单元8．3 用放射标记的脂肪酸进行的代谢性标记 298
单元8．4 细胞蛋白质的放射性碘化 299
单元8．5 免疫沉淀 304
单元8．6 酵母蛋白的代谢标记和免疫沉淀 309
第9章 蛋白质的磷酸化作用 313
单元9．1 用32P标记培养细胞和制备用于免疫沉淀的细胞裂解物 314
单元9．2 磷酸化的免疫检测 316
单元9．3 MAP蛋白激酶信号的检测 321
第lO章 蛋白质转运 328
单元10．1 用糖苷酶研究蛋白质转运 329
单元10．2 内吞作用 333
单元10．3 蛋白质转运到质膜 341
单元10．4 极化上皮细胞中的膜转运 343
第11章 细胞增殖，细胞衰老和细胞死亡 351
单元11．1 用流式细胞术确定细胞周期阶段 352
单元11．2 在细胞周期的特定时期细胞同步化的方法 358
单元11．3 分析细胞周期中CDK活性和DNA复制 365
单元11．4 通过DNA片段化和形态学标准评价凋亡和坏死 370
单元11．5 细胞凋亡期间Caspase活化分析 382
第12章 体外重建 390
单元12．1 体外翻译 392
单元12．2 蛋白质共翻译转运进入犬粗面微粒体 401
单元12．3 体外分析哺乳动物细胞中内质网到高尔基体的物质运输 405
单元12．4 用洋地黄皂苷透化细胞进行核物质输入 416
单元12．5 非洲爪蟾间期卵提取物的制备和使用 422
单元12．6 利用非洲爪蟾卵细胞提取物分析细胞周期 434
单元12．7 有丝分裂纺锤体的体外组装 442
单元12．8 利用非洲爪蟾卵提取物研究细胞凋亡 452
单元12．9 体外转录 456
第13章 细胞黏附与细胞外基质 465
单元13．1 细胞一底物黏附试验 467
单元13．2 利用离心力定量测定细胞黏附能力 47l
单元13．3 依赖钙黏素的细胞一细胞黏附 474
单元13．4 分析整合素依赖性黏附 482
单元13．5 分析由免疫球蛋白超家族细胞黏附分子所介导的细胞一细胞联系490
单元13．6 纤连蛋白的纯化 502
单元13．7 玻连蛋白的纯化 507
单元13．8 制备胶冻状的基质 509
单元13．9 制备培养的角膜内皮细胞和P卜HR9内胚层细胞分泌的细胞外基质 512
单元13．10 制备培养的成纤维细胞产生的细胞外基质 516
单元13．11 蛋白聚糖的分离和分析 522
单元13．12 基质金属蛋白酶 529
第14章 细胞的能动性 535
单元14．1 真核细胞趋化实验535
单元14．2 侵袭实验 543
单元14．3 细胞牵引力 545
单元14．4 细胞损伤实验 553
单元14．5 盘基网柄菌属细胞动力学 558
第15章 细胞器运动 564
单元15．1 微管／细胞器运动实验 564
单元15．2 肌动蛋白通过肌球蛋白移动的体外运动实验 575
单元15．3 植物细胞的细胞器运动：通过绿色荧光蛋白(GFP)使高尔基复合体和内质网的运动成像 580
单元15．4 细胞核运动 582
附录 593
附录1 试剂与溶液 593
附录2 实用信息和数据 709
附录3 常用技术 750
附录4 试剂和仪器设备供应商选录 781
参考文献 827
索引 835
